Первое отечественное учебное пособие, в котором рассмотрены основные понятия и методы генетической инженерии — новой области современной экспериментальной биологии и биохимии. Дан критический анализ подходов к созданию молекулярных векторов, синтезу искусственных генов, конструированию и отбору гибридных молекул ДНК, достижению эффективной экспрессии клонированных генов в бактериальных клетках. Рассмотрены такие новейшие подходы, как направленный мутагенез и белковая инженерия.
Издание рассчитано на студентов и преподавателей биологических и химических факультетов, -а также научных сотрудников, работающих в области молекулярной биологии, генетики, биохимии, микробиологии и биотехнологии.
Табл. 14. Ил. 136. Библиогр.: 253 назв.
Author(s): Щелкунов Сергей Николаевич
Publisher: Издательство Новосибирского университета
Year: 1994
Pages: 305
City: Новосибирск
ОГЛАВЛЕНИЕ
Предисловие
Глава I. Общие принципы и методы генетической инженерии
1.1. Строение молекулы ДНК
1.2. Ферменты генетической инженерии
1.2.1. Рестриктазы
1.2.2. ДНК-лигаза
1.2.3. ДНК-полимераза I E.coli
1.2.4. Обратная транскриптаза
1.2.5. Нуклеаза Ваl31
1.2.6. Концевая дезоксинуклеотидилтрансфераза
1.2.7. Поли (А)-полимераза E.coli
1.3. Методы конструирования гибридных молекул ДНК in vitro
1.4. Векторные молекулы ДНК
1.5. Введение молекул ДНК в клетки
1.6. Методы отбора гибридных клонов
1.7. Методы расшифровки нуклеотидной последовательности фрагментов ДНК
1.8. Амплификация последовательностей ДНК in vitro
1.9. Перенос нуклеиновых кислот из агарозных гелей на нитроцеллюлозную бумагу
1.10. Разделение электрофорезом гигантских молекул ДНК
1.11. Методы химико-ферментативного синтеза двухцепочечных фрагментов ДНК
1.11.1. Метод Кораны
1.11.2. Конструирование искусственных ДНК на твердых матрицах
1.11.3. Конструирование ДНК-дуплексов из частично комплементарных полинуклеотидов
1.11.4. Конструирование искусственных генов из сверхдлинных полинуклеотидов
Глава 2. Генно-инженерная система грамотрицательной бактерии Escherichia coli
2.1. Методы введения плазмидных и фаговых молекул ДНК в клетки E.coli
2.2. Молекулярные векторы E.coli
2.2.1. Клонирующие плазмидные векторы
2.2.2. Молекулярные векторы на основе ДНК фага лямбда
2.2.3. Космиды
2.2.4. Фазмиды
2.2.5. Клонирующие векторы на основе нитевидных фагов
2.2.6. Векторные плазмиды, обеспечивающие прямой отбор гибридных ДНК
2.2.7. Векторы, обеспечивающие экспрессию чужеродных генов в клетках E.coli
2.2.8. Векторы E.coli, детерминирующие секрецию чужеродных белков
2.2.9. Использование фага Т4 в качестве клонирующего вектора
Глава 3. Достижение повышенной продукции белков, кодируемых генами, клонированными в клетках E.coli
3.1. Эффект дозы гена при молекулярном клонировании
3.2. Влияние эффективности транскрипции клонированных генов на уровень их экспрессии
3.3. Повышение эффективности трансляции матричных РНК
3.4. Стабилизация чужеродных мРНК и белков в клетках E.coli
Глава 4. Экспрессия клонированных эукариотических генов в клетках E.coli
4.1. Сравнительный анализ организации и реализации генетической информации у прокариот и эукариот
4.2. Экспрессия хромосомных эукариотических генов в клеткахE.coli
4.3. Клонирование ДНК-копий эукариотических матричных РНК и их экспрессия в клетках E.coli
4.4. Экспрессия в E.coli химико-ферментативно синтезированных ген-эквивалентов эукариотических полипептидов
Глава 5. Конструирование штаммов-продуцентов первичных метаболитов на основе E.coli
Глава 6. Направленный мутагенез молекул ДНК in vitro
6.1. Генно-инженерные делеции и вставки последовательностей ДНК
6.2. Статистический мутагенез гибридных ДНК
6.3. Сегмент-направленный мутагенез in vitro
6.4. Олигонуклеотид-направленный мутагенез in vitro
Глава 7. Белковая инженерия
7.1. Получение новых форм белков сайт-направленным мутагенезом
7.2. Изучение доменной структуры белков
7.3. Создание белков с гибридными свойствами
7.4. Иммунотоксины
7.5. Искусственные иммуногены
Глава 8. Стабильность гибридных молекул ДНК в клетках E.coli
Рекомендуемая литература
