Методы культуры клеток для биохимиков

Оглавление

Предисловие редактора перевода [5] Благодарности [6] Глава 1. Введение [7] 1.1. Основы [7] 1.2. Некоторые преимущества [8] 1.3. Применения [10] 1.3.1. Дифференцировка [10] 1.3.2. Генетика [11] 1.3.3. Иммунология [12] 1.3.4. Гормоны [12] 1.3.5. Образование клеточных продуктов [13] 1.3.6. Вирусология и трансформация клеток [14] 1.3.7. Определение цитотоксичности [15] 1.4. Культура растительной ткани [16] Глава 2. Характерные особенности культивируемых клеток [18] 2.1. Первичные клетки и трансформация [18] 2.2. Потребности в питательных веществах [20] 2.3. Контроль роста [22] 2.3.1. Клеточный цикл и цикл роста [22] 2.3.2. Зависимость от прикрепления и рост в суспензии [23] 2.3.3. Регуляция, зависящая от плотности культуры (контактное торможение) [24] 2.3.4. Клеточная мембрана [25] 2.4. Дифференцировочные функции в культуре клеток [27] 2.5. Фирмы-поставщики и транспортирование [28] Глава 3. Посуда, используемая при культивировании [30] 3.1. Выбор посуды [30] 3.1.1. Газовый обмен [30] 3.1.2. Закупоренные сосуды [30] 3.1.3. Техника перфузии [31] 3.2. Монослойные культуры [32] 3.2.1. Мелкомасштабные культуры [32] 3.2.2. Культуры промежуточного масштаба [34] 3.2.3. Крупномасштабные культуры [34] 3.3. Суспензионные культуры [39] 3.4. Микроносители [40] Глава 4. Подготовка посуды и техника стерилизации [44] 4.1. Общие замечания [44] 4.1.1, Процедура мытья [45] 4.1.2, Бутыли и пипетки [45] 4.1.3, Резиновые пробки [46] 4.1.4, Моечные машины [46] 4.2. Методы стерилизации [46] 4.2.1. Горячий воздух [46] 4.2.2. Автоклавирование [47] 4.2.3. Контроль стерилизации [48] 4.2.4. Фильтрование [48] Глава 5. Пересев [52] 5.1. Техника диссоциации [52] 5.1.1. Трипсин [52] 5.1.2. Проназа [53] 5.1.3. Коллагеназа [53] 5.1.4. Версен (ЭДТА) [54] 5.1.5. Механические методы [55] 5.2. Пересев Клеточного моноСлоя [56] 5.2.1. Подсчет живых клеток [56] 5.2.2. Проверка на бактериальное заражение [57] 5.3. Цикл роста [57] Глава 6. Первичные клетки [60] 6.1. Введение [60] 6.2. Лимфоциты [60] 6.2.1. Выделение лейкоцитов и аутологичной плазмы [60] 6.2.2. Очистка лимфоцитов [61] 6.2.3. Метод очистки на колонке со стеклянными бусами [61] 6.2.4. Метод градиентного центрифугирования [62] 6.2.5. Культивируемые лимфоциты [63] 6.2.6. Разделение Т- и В-лимфоцитов [64] 6.3. Биопсия кожи человека [65] 6.4. Первичные клетки почки [66] 6.5. Культуры мышиных макрофагов [68] 6.6. Клетки скелетных мышц крысы или цыпленка [68] 6.7. Культуры клеток мышиного эмбриона [69] 6.8. Клетки куриного эмбриона [70] 6.9. Клетки печени куриных эмбрионов [71] 6.10. Культура клеток двукрылых [72] Глава 7. Среды для культуры клеток [74] 7.1. Введение [74] 7.2. Сбалансированные долевые растворы [75] 7.2.1. Цвиттерионные буферы [77] 7.3. Среда Игла [78] 7.3.1. Сухие среды [79] 7.4. Более усложненные, среды [80] 7.5. Простые среды с неидентифицированными добавками [81] 7.6. Антибиотики [81] 7.7. Сыворотка [82] 7.7.1. Удаление из сыворотки маленьких молекул [82] 7.7.2. Роль сыворотки [84] 7.8. Другие природные добавки [89] 7.9. Среды для культивирования клеток насекомых [89] Глава 8. Методы [89] 8.1. Клонирование клеток и эффективность посева [89] 8.1.1. Простые методы клонирования или определения эффективности посева [89] 8.1.2. Капиллярный метод [91] 8.1.3. Клонирование под агаром [91] 8.1.4. Клонирование на фидерном слое [92] 8.2. Методы счета клеток [93] 8.2.1. Гемоцитометр [93] 8.2.2. Электронный счетчик клеток [94] 8.2.3. Сравнение методов [97] 8.3. Хранение клеток [98] 8.3.1. Процедура замораживания [99] 8.3.2. Размораживание клеток после хранения в жидком азоте [101] 8.3.3. Организация стоков замороженных клеток [101] 8.4. Кариотипирование [102] 8.4.1. Приготовление хромосом для анализа [102] 8.4.2. Кариотипирование [103] 8.4.3. Q-сегментация [105] 8.4.4. О-сегментация [105] 8.5. Визуализация клеток [106] 8.5.1. Фазово-контрастная микроскопия [107] 8.5.2. Флуоресцентная микроскопия [108] Глава 9. Бактериальные загрязнения [109] 9.1. Бактериальные загрязнения [109] 9.1.1. Стеклянная и пластиковая посуда [109] 9.1.2. Клетки [109] 9.1.3. Среда [109] 9.2. Проверка стерильности [110] 9.3. Анализ бактериальных загрязнений [111] 9.4. Загрязнения из воздуха [112] 9.4.1. Асептическая техника [112] 9.4.2. Системы с ламинарным током воздуха [114] 9.5. Антибиотики [114] 9.6. Удаление загрязненного материала [115] 9.7. Микоплазмы [115] 9.7.1. Влияние на культуры клеток [116] 9.7.2. Культуры микоплазм [116] 9.8. Окрашивание микоплазмы [118] 9.8.1. Окрашивание орсеином [118] 9.8.2. Радиоавтография [118] 9.8.3. Флуоресцентное окрашивание [119] 9.9. Удаление микоплазмы [120] 9.10. Вирусное загрязнение [121] Глава 10. Клеточный цикл [123] 10.1. Описание [123] 10.2. Митоз [123] 10.3. Фаза S [124] 10.4. Контроль клеточного цикла [127] 10.5. Распределение клеток по циклу [130] 10.6. Пролиферативный пул [132] 10.7. Анализ клеточного цикла [133] 10.7.1. Метод импульсного включения тритированного тимидина [133] 10.7.2. Метод непрерывного мечения [134] 10.7.3. Функции накопления [136] 10.7.4. Графический анализ [138] 10.7.5. Проточная микрофлуориметрия [140] 10.8. Яды, облучение и клеточный цикл [142] 10.8.1. Фаза S [142] 10.8.2. Фаза Q2 [142] 10.8.3. Фаза G1 [144] 10.9. Тимидинкиназа и моделирование клеточного цикла на ЭВМ [144] Глава 11. Синхронизация клеток [146] 11.1. Введение [146] 11.2. Отбор митотических клеток [146] 11.2.1. Встряхивание [147] 11.2.2. Трипсинизация [148] 11.3. Избирательная гибель клеток в одной из фаз клеточного цикла [148] 11.4. Отбор клеток по размеру [149] 11.4.1. Отбор клеток в электронном счетчике [149] 11.4.2. Зональное центрифугирование [150] 11.5. Синхронизация пересевом [152] 11.6. Недостаточное содержание сыворотки [154] 11.7. Голодание по изолейцину [155] 11.8. Блокирование фазы S [156] 11.8.1. Действие аминоптерина и аметоптерина (метотрексата) [157] 11.8.2. Действие 5-фтордезоксиуридина [159] 11.8.3. Действие высоких концентраций тимидина [159] 11.8.4. Действие гидроксимочевины [160] 11.9. Индукция синхронизации на границе фаз G1/6 [160] 11.9.1. Голодание по изолейцину и гидроксимочевина [160] 11.9.2. Клетки в стационарной фазе и аминоптерин [161] 11.9.3. Двойной тимидиновый блок [161] 11.9.4. Сравнение методов [161] 11.10. Синхронизация в фазе G2 [162] Глава 12. Использование радиоактивных изотопов в клеточной культуре [163] 12.1. Определение скоростей синтеза ДНК [163] 12.1.1. Решение проблемы [167] 12.1.2. Применение к суспензионным культурам [172] 12.2. Оценка скоростей синтеза РНК и белка [173] 12.3. Радиоавтография [174] 12.3.1. Эмульсии [174] 12.3.2. Отделяемые пленки [175] 12.3.3. Жидкая эмульсия [176] 12.3.4. Радиоавтография в чашках [177] 12.3.5. Значимость подсчета числа зерен [177] 12.3.6. Фоновое число зерен [179] 12.3.7. Радиоавтография водорастворимых компонентов [179] 12.4. Репарация ДНК [181] 12.4.1. Ультрафиолетовое облучение [182] 12.4.2. Изменение репаративного синтеза [182] Глава 13. Клеточные мутанты и гибридные клетки [183] 13.1. Ауксотрофные мутанты [183] 13.2. Отбор мутантов [184] 13.2.1. Процедура выделения ТК-мутантов [187] 13.3. Температурочувствительные мутанты [187] 13.4. Посев реплик животных клеток [188] 13.5. Гибридизация соматических клеток [189] 13.5.1. Слияние клеток с помощью вируса Сендаи [191] 13.5.2. Слияние клеток BHR21/C13 с эритроцитами кур с использованием вируса Сендай [192] 13.5.3. Слияние клеток с помощью лизолецитина [193] 13.5.4. Слияние клеток с использованием полиэтиленгликоля [193] 13.6. Межклеточные связи [194] 13.6.1. Подсчет числа зерен н межклеточные связи [195] Глава 14. Вирусы [196] 14.1. Введение [196] 14.1.1. Классификация вирусов животных [197] 14.1.2. Предосторожности при работе с зараженными вирусами клетками [197] 14.2. Получение вирусов [199] 14.2.1. Процедура получения вируса герпеса простого, вируса псевдобешенства или вируса энцефаломиокардита [199] 14.2.2. Процедура для получения вируса SV40 [200] 14.2.3. Одноэтапный рост SV40 [201] 14.2.4. Вирус Сендай — получение и инактивация [202] 14.3. Обнаружение вирусов [203] 14.3.1. Метод подсчета бляшек [204] 14.3.2. Метод флуоресцирующих антител [208] 14.3.3. Гемагглютинация [211] 14.4. Трансформация клеток вирусом [212] 14.4.1. Методы трансформации [212] Глава 15. Дифференцировка в культурах клеток [214] 15.1. Эритроидная дифференцнровка клеток Френд [214] 15.1.1. Индукция синтеза глобина в клетках Френд [215] 15.2. Кожа и кератиноциты [215] 15.3. Клетки тератокарцнномы [217] 15.4. Культуры миеломных клеток и образование антител [219] 15.5. Дифференцировка мышечных клеток [220] 15.6. Днфференцнровка жировых клеток [221] Глава 16. Приложения [222] Приложение 1. Составы сред [222] Приложение 2. Красители и фиксаторы [235] Приложение 3. Фирмы, поставляющие приборы и реактивы [236] Приложение 4. Проверка стерильности [238] Приложение 5. Испытания [240] Приложение 6. Сокращения [242] Литература [244] Предметный указатель [256]