Практическое руководство. — М.: Мир, 1984. — 176 c.: ил.Книга представляет собой практическое руководство по генетической инженерии бактерий, написанное американскими авторами. Подробно изложены методы экспериментов с мигрирующими генетическими элементами, методы конструирования гибридных молекул ДНК, техника работы с фаговыми, плазмидными и бактериальными ДНК. Справочный раздел содержит сведения о наиболее употребляемых средах для культивирования бактерий, условиях хранения штаммов бактерий и препаратов ДНК, ферментах рестрикции, физических картах плазмидиых и фаговых векторов и т.д.
Предназначена для молекулярных биологов, биохимиков, генетиков, микробиологов, вирусологов.Содержание
Эксперименты
Выделение вставок Tn10, приводящих к ауксотрофности
Выделение вставок Tn10 вблизи определенных генов
Делеции, вызванные элементом Tn10
Локализованный мутагенез
Выделение и характеристика точковых мутантов фага λ, полученных с помощью гидроксиламина
Выделение делеционных мутантов λamp
Картирование делеций
Отбор клонов λgt-his по комплементации
Гибридизация бляшек
Гибридизация из геля (блот-гибридизация)
Электронная микроскопия ДНК
Субклонироваиие из фага λ в плазмидиом векторе
Встраивание F’tslас+, направляемое Tn10
Методики
Очистка фага методом бляшек
Получение препаратов фага
Быстрый метод получения трансдуцирующего фага P22
Очистка фага
Транспозиция элемента Tn10
Отбор мутантов Tets среди штаммов, несущих элемент Tn10
Выделение фага λ с функционирующим геном β-лактамазы на чашках Red
Индукция мутаций гидроксиламином
Отбор делеционных мутантов фага λ
Тесты на рекомбинацию и комплементацию фага in vivo
Выделение ДНК из фага λ
Выделение плазмидной и бактериальной ДНК
Удаление бромистого этидия из ДНК, находящейся в растворе CsCl
Образование гибридных фагов λgt
Упаковка ДНК фага λ в вирусные частицы in vitro
Трансфекция ДНК фага λ
Субклонирование фрагментов ДНК в векторах-плазмидах E. coli
Трансформация плазмидной ДНК
Способность гибридного фага к комплементации в клетках E. coli
Электрофорез в агарозном геле
Перенос ДНК на нитроцеллюлозу или диазотированную бумагу
Внесение метки α-32P в ДНК с помощью ник-трансляции
Гибридизация с иммобилизованной ДНК или РНК на твёрдом носителе
Радиоавтография 32P, связавшегося с фильтром
Выделение ДНК из агарозного геля
Быстрая оценка концентрации ДНК с использованием бромистого этидия
Электронная микроскопия ДНК
Обычная методика образования гетеродуплексов
Выделение ферментных препаратов из клеток, лизогенных по фагу λcI857 Sam7
Приложения
Среды, концентрации лекарственных препаратов, пищевые добавки
Диагностика ауксотрофов (ауксанография)
Хранение бактерий, фагов и ДНК
Буферы и растворы
Подготовка трубок для диализа
Измерение объемов, единицы
Расщепление рестриктирующими эндонуклеазами
Емкость векторов, образуемых на основе фага λ
Рестрикционные карты
Карта делеций в гистидиновом опероне
ШаблоныИзображение с текстовым слоем.
